无码人妻一区二区三区在线视频-无码人妻一区二区三区在线-无码人妻一区二区三区免费视频-无码人妻一区二区三区免费看-无码人妻一区二区三区免费费-无码人妻系列

1、非洲豬瘟病毒簡(jiǎn)介

 

非洲豬瘟（ASF）的病原是單一的、有囊膜的、存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的雙鏈DNA 病毒，是非洲豬瘟病毒科的唯一成員。目前為止，通過(guò)對(duì)已知所有的 ASF 病毒毒株進(jìn)行遺傳特征分析，已經(jīng)證實(shí)了 23 個(gè)具有多個(gè)亞組的地理相關(guān)基因型，這說(shuō)明了 ASF 流行病學(xué)的復(fù)雜性。基因型是根據(jù)編碼 VP-72 蛋白的單一基因序列確定的，蛋白質(zhì) (VP-72) 中片段變異性的反映，主要用于系統(tǒng)發(fā)育和分子流行病學(xué)研究 ( 例如識(shí)別暴發(fā)的來(lái)源 )。就目前所知，與毒力和其他病毒特性無(wú)關(guān)。

家養(yǎng)豬感染ASF后，發(fā)病過(guò)程短，致死率往往接近90-100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，嘔吐，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)，腎，胃腸粘膜明顯出血等癥狀。

2、非洲豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷方法

 

由于非洲豬瘟缺乏預(yù)防用疫苗，為防止疫病的傳播，就需要實(shí)施嚴(yán)格的衛(wèi)生和生物安全控制措施，而這就依賴于疫病的快速、可靠的早期診斷。

 

（1）紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)（HA）

ASFV 的紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)是該病毒特有的檢測(cè)技術(shù)，其他豬源病毒在白細(xì)胞培養(yǎng)物中不存在紅細(xì)胞吸附特性。當(dāng)病毒在這些培養(yǎng)物中復(fù)制時(shí)，多數(shù)ASFV 毒株會(huì)產(chǎn)生紅細(xì)胞吸附反應(yīng)(HAD)，在感染的白細(xì)胞周圍吸附豬紅細(xì)胞形成 “玫瑰花環(huán)”。但是在沒(méi)有發(fā)生紅細(xì)胞吸附反應(yīng)的時(shí)候出現(xiàn)細(xì)胞病變（CPE），需采用FAT或PCR方法輔助診斷。

 

（2）PCR檢測(cè)非洲豬瘟病毒基因組

 PCR 已成功應(yīng)用于豬樣品（血液、器官等）和蜱中ASFV 基因組的檢測(cè)。病毒DNA 片段通過(guò)PCR 擴(kuò)增獲得足以檢測(cè)的量，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。所有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的PCR 技術(shù)均可以在臨床癥狀出現(xiàn)前實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。PCR 能在樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室數(shù)小時(shí)內(nèi)，完成ASF 的診斷。PCR 是可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV 檢測(cè)技術(shù)。同時(shí)，相比于抗原檢測(cè)技術(shù)，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和直接熒光抗體測(cè)試（FAT），具有更高的敏感性和特異性。

 

（3）直接熒光抗體法對(duì)非洲豬瘟抗原的檢測(cè)（FAT法）

FAT 可用于檢測(cè)豬組織中的 ASFV 抗原。檢測(cè)原理是通過(guò)顯微觀察感染臟器涂片或薄層冷凍切片上的病毒抗原實(shí)現(xiàn)的。使用異硫氰酸熒光素（FITC）結(jié)合的特異性抗體檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原。FAT 也可用于檢測(cè)未觀察到 HAD 的白細(xì)胞培養(yǎng)物中的 ASFV 抗原，因此可以鑒定不產(chǎn)生 HAD 反應(yīng)的 ASFV 毒株。FAT 還可用于鑒別CPE 是由 ASFV 感染導(dǎo)致的，還是由其他病毒感染或者導(dǎo)致的接種的細(xì)胞毒性導(dǎo)致的。該方法也是對(duì)特急性和急性 ASF 病例的高度敏感的檢測(cè)技術(shù)，且可以非常快速的完成檢測(cè)。雖然 FAT 是高效的檢測(cè)技術(shù)，但目前已被 PCR 逐步取代，所需試劑也不再?gòu)V泛使用。然而在亞急性和慢性型感染中，F(xiàn)AT 的敏感性明顯降低（40%）。

 

（4）ELISA檢測(cè)非洲豬瘟抗原

也可以使用 ELISA 檢測(cè)病毒抗原，其成本比 PCR 更為低廉，并且可在沒(méi)有特殊的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的條件下，短時(shí)間內(nèi)對(duì)樣品的大規(guī)模篩查。然而，與 FAT 相似，對(duì)于亞急性和慢性病例，抗原ELISA 的敏感性明顯較低。同時(shí)，現(xiàn)地樣品通常狀態(tài)不佳，因此也降低了檢測(cè)的敏感性。因此建議抗原ELISA（或其他ELISA）主要用于 “群體”檢測(cè)，并輔助以其他病毒學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)。

 

（5）血清學(xué)抗體檢測(cè)

對(duì)于檢測(cè)ASF 抗體，推薦使用ELISA 篩查抗體陽(yáng)性樣品，并采取免疫印跡試驗(yàn)（IB）或間接熒光抗體（IFA）試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。此外，間接免疫過(guò)氧化物酶的抗體檢測(cè)技術(shù)也可用作豬血清和組織滲出物中ASF 抗體檢測(cè)的替代試驗(yàn)。該技術(shù)也適用于大量樣品的檢測(cè)，而無(wú)需昂貴的熒光顯微鏡設(shè)備，且敏感性較高。但是此外， ASFV 抗體在感染早期即可出現(xiàn)，并持續(xù)數(shù)年。然而，在特急性和急性感染中，豬通常在抗體轉(zhuǎn)為陽(yáng)性前已死亡。因此，在疫病暴發(fā)的早期階段，建議采集樣品檢測(cè)病毒DNA。

總結(jié)：現(xiàn)有ASFV檢測(cè)技術(shù)最常用的是PCR和ELISA抗體檢測(cè)，但是這兩項(xiàng)技術(shù)需要耗時(shí)在3h 以上，且必須在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)依賴專業(yè)的人員完成，給家豬的日常檢測(cè)、早期檢測(cè)、早期診斷帶來(lái)一定技術(shù)難度，ASFV的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)將會(huì)是未來(lái)發(fā)展的一個(gè)重點(diǎn)。